熒光素酶（luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的總稱，其中最有代表性的是從甲蟲中分離得到的螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）和從海腎中分離得到的海腎熒光素酶（Renilla luciferase）。由于兩種酶底物和發(fā)光顏色的區(qū)別，且在動物體內(nèi)無內(nèi)源性表達(dá)，使其在雙報告實驗中得到廣泛應(yīng)用。熒光素酶作為一種理想的報告基因，可用于啟動子研究、miRNA研究、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究等。
1 構(gòu)建報告基因質(zhì)粒的構(gòu)建
2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，篩選陽性克隆
3 報告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞
4 提取蛋白加入底物，測定熒光素酶的活性
5 計算相對熒光強(qiáng)度
1、血清樣本(干冰運輸)
將收集好的全血，靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存（-20℃或-80℃）。
2、血漿樣本(干冰運輸)
收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存（-20℃或-80℃）。
3、組織樣本
取組織塊（0.1g～0.2g）最少可到2～5mg在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，準(zhǔn)確稱重，放入5ml的勻漿管中。按重量：體積=1：9的比例加入勻漿介質(zhì)或者0.86%的生理鹽水于勻漿管中，冰水浴條件下，用眼科小剪盡快剪碎組織塊，進(jìn)行勻漿。將制備好的勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)2500轉(zhuǎn)/分左右，離心10～15分鐘，取上清液進(jìn)行測定。制備好的勻漿液建議不要凍存，最好當(dāng)天進(jìn)行測定，如放置時間過長相關(guān)酶活會有所下降。
4、細(xì)胞樣本
貼壁細(xì)胞：用胰酶將細(xì)胞消化下來，或用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下來，將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運輸。
懸浮細(xì)胞：將培養(yǎng)液1000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運輸。
細(xì)胞上清：3000轉(zhuǎn)/分，離心15min取上清，上清立即用于實驗，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。
