為基因功能研究者提供前沿、全面、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)妮d體設(shè)計(jì)和載體構(gòu)建服務(wù),內(nèi)容涵蓋普通真核表達(dá)載體、病毒載體等。
病毒載體構(gòu)建服務(wù)包含慢病毒、腺相關(guān)病毒、腺病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒載體等,構(gòu)建內(nèi)容包括基因過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建、基因定點(diǎn)突變表達(dá)載體構(gòu)建、用于基因沉默的shRNA設(shè)計(jì)與構(gòu)建、microRNA表達(dá)與封閉載體設(shè)計(jì)與構(gòu)建、螢光素酶報(bào)告基因載體構(gòu)建(UTR、啟動(dòng)子及其它功能序列)以及Cre-LoxP系統(tǒng)和CRISPR/Cas9基因編輯工具載體設(shè)計(jì)與構(gòu)建等,力求一站式解決基因功能研究中的基因上調(diào)和基因下調(diào)需求。
質(zhì)粒優(yōu)勢(shì):
①表達(dá)時(shí)間快,導(dǎo)入細(xì)胞后約24小時(shí)可觀察到目的基因表達(dá);
②構(gòu)建技術(shù)簡(jiǎn)單,成本低。
③和元的過(guò)表達(dá)載體庫(kù)豐富,并且過(guò)表達(dá)的標(biāo)記豐富
熒光標(biāo)記:GFP、mCherry、CFP、BFP、EYFP、mNeonGreen、tdTomato、 mScarlet…
標(biāo)簽標(biāo)記: FLAG、 HA 、Myc、His tag…
抗性標(biāo)記:Puro、Neo、Hygro、BSD…
局限性:
①轉(zhuǎn)染試劑具有細(xì)胞毒性,使用后影響細(xì)胞狀態(tài);
②大部分細(xì)胞較難轉(zhuǎn)染,達(dá)不到基因操作目的;
③質(zhì)粒不整合到細(xì)胞基因組,只能進(jìn)行短時(shí)間的瞬時(shí)表達(dá),無(wú)法進(jìn)行觀察周期較長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)。
由于單純質(zhì)粒存在一定的局限性,根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要需包成病毒進(jìn)一步滿足不同實(shí)驗(yàn)的需求。
不同表達(dá)載體的區(qū)別