簡(jiǎn)化基因組測(cè)序(Reduced-Representation Genome Sequencing, RRGS)是對(duì)部分基因組進(jìn)行序列測(cè)定。它是指利用生物信息學(xué)方法,設(shè)計(jì)標(biāo)記開(kāi)發(fā)方案,富集特異性長(zhǎng)度片段,應(yīng)用高通量測(cè)序技術(shù)獲得海量標(biāo)簽序列來(lái)代表目標(biāo)物種全基因組信息的測(cè)序方法。
方案靈活:可根據(jù)每個(gè)客戶(hù)的研究目標(biāo)和內(nèi)容靈活定制研究方案
重復(fù)性高:不經(jīng)過(guò)片段大小選擇,技術(shù)重復(fù)度好
數(shù)據(jù)可信度高:基于混合泊松分布模型的de novo SNP分型算法iML,有效去除重復(fù)序列對(duì)分型的干擾
細(xì)胞,動(dòng)植物組織,血液,總DNA等
建議總DNA起始量>20 μg,濃度>100 ng/μl,
OD260/280介于1.8-2.0之間,并確保DNA無(wú)降解。
A:高密度SNPs標(biāo)記開(kāi)發(fā)的基本條件和設(shè)計(jì)理念是所獲得的片段盡量在基因組上分布均勻,通過(guò)測(cè)定少量代表全基因組信息的序列獲得的成千上萬(wàn)SNPs標(biāo)記。首先要利用生物信息學(xué)方法對(duì)目標(biāo)物種參考基因組(或已知BAC序列)進(jìn)行系統(tǒng)分析,根據(jù)基因組GC含量、重復(fù)序列情況和基因特點(diǎn)等信息,選擇相應(yīng)的限制性酶以及測(cè)序文庫(kù)類(lèi)型,以保證分子標(biāo)記的密度、均勻性、效率滿足遺傳分析和分子育種的需要。
A:簡(jiǎn)化基因組測(cè)序常用測(cè)序文庫(kù)類(lèi)型可以歸納為3個(gè)大類(lèi):①簡(jiǎn)化測(cè)序,包括簡(jiǎn)化文庫(kù)(reduced-representation libraries,RRLs)和簡(jiǎn)化多態(tài)序列復(fù)雜性(complexity reduction of polymorphic sequences,CroPS);②限制性酶切位點(diǎn)關(guān)聯(lián)DNA測(cè)序(restriction-site-associated DNA sequencing,RAD-seq);③低覆蓋基因分型文庫(kù),包括多元鳥(niǎo)槍法基因分型(multiplexed shotgun genotyping,MSG)和基于測(cè)序的基因分型(genotyping by sequencing,GBS)。
茄子是第三個(gè)最重要的茄科作物(僅次于馬鈴薯和番茄),在2010年全球產(chǎn)量為41.8 Mt,是中東、東非、南亞地區(qū)和歐洲南部的重要蔬菜。通過(guò)遺傳重組所得到的基因在具體染色體上線性排列圖稱(chēng)為遺傳連鎖圖譜。遺傳連鎖圖譜是定位和分析植物和動(dòng)物的復(fù)雜性狀的重要資源。
利用Illumina的高通量測(cè)序平臺(tái),采用限制性酶切DNA(RAD)技術(shù),對(duì)茄子進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性(SNP)的開(kāi)發(fā),完成其遺傳圖譜的構(gòu)建,并對(duì)花青素苷呈色性狀的數(shù)量性狀位點(diǎn)(QTL)進(jìn)行定位。
在茄子基因組上共發(fā)現(xiàn)了347個(gè)新的SNP標(biāo)記和84個(gè)錨定標(biāo)記,用431個(gè)標(biāo)記中的415個(gè)標(biāo)記構(gòu)建了相應(yīng)的茄子遺傳連鎖圖譜。圖譜跨越的總遺傳距離為1390 cM,包含了12個(gè)連鎖群。并據(jù)此對(duì)花青素苷呈色性狀進(jìn)行了相應(yīng)的定位。結(jié)果顯示其與七個(gè)性狀相關(guān),每個(gè)性狀分別受一至六個(gè)數(shù)量性狀位點(diǎn)(QTL)控制,并且其中至少有一個(gè)QTL起著主要作用。
Lorenzo Barchi, et al. A RAD Tag Derived Marker Based Eggplant Linkage Map and the Location of QTLs Determining Anthocyanin Pigmentation. PLoS One, 2012, 7 (8) : e43740.