背景簡(jiǎn)介
外泌體（Exosome）是由包括腫瘤細(xì)胞在內(nèi)的幾乎所有類型的細(xì)胞都可以產(chǎn)生并釋放的一種微囊，其內(nèi)部包裹了DNA，RNA，蛋白等物質(zhì)。眾多的研究表明，外泌體在血液，乳汁，尿液等體液內(nèi)傳播，其內(nèi)容物如miRNA可被其他細(xì)胞吞噬，成為細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì)。越來(lái)越多的證據(jù)表明，宿主細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體參與了腫瘤發(fā)生、生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移。 外泌體上述特征和生物學(xué)功能，使其成為液體活檢領(lǐng)域的重要研究對(duì)象，其所含RNA分子如miRNA，lncRNA，circRNA等是極具應(yīng)用前景的臨床診斷分子標(biāo)志物。聯(lián)川生物依托豐富的RNA項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)和領(lǐng)先的生信分析實(shí)力，推出了針對(duì)外泌體RNA研究的系統(tǒng)解決方案，將協(xié)助科研人員深度開(kāi)展外泌體mRNA、miRNA、lncRNA等的鑒定和功能分析.
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
國(guó)內(nèi)最早的外泌體研究科技服務(wù)商，外泌體RNA項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)豐富
芯片和測(cè)序兩大高通量檢測(cè)平臺(tái)，滿足外泌體RNA的不同分析需求
采用更低樣本量和專業(yè)外泌體分離試劑盒，更能勝任外泌體實(shí)驗(yàn)的獨(dú)特性
多套外泌體RNA研究方案，滿足外泌體mRNA，lncRNA，miRNA的不同研究需求
技術(shù)路線
分析內(nèi)容
樣本類型
血清（≥2 mL），血漿（≥ 2 mL），細(xì)胞上清液（≥ 15 mL），
乳汁（≥10 mL），尿液（≥ 15 mL），無(wú)DNA污染的總RNA等
建議總RNA起始量（單次）：≥1 μg，濃度≥ 20 ng/μL （原則上越多越好）
近期用戶文章
1. Gu Y, Li M, Wang T, et al. Lactation-Related MicroRNA Expression Profiles of Porcine Breast Milk Exosomes[J]. Plos One, 2012, 7(8):e43691.
2. Gildea J J, Carlson J M, Schoeffel C D, et al. Urinary exosome miRNome analysis and its applications to salt sensitivity of blood pressure.[J]. Clinical Biochemistry, 2013, 46(12):1131-1134.
3. Yelamanchili S V, Lamberty B G, Rennard D A, et al. MiR-21 in Extracellular Vesicles Leads to Neurotoxicity via TLR7 Signaling in SIV Neurological Disease[J]. Plos Pathogens, 2015, 11(7):e1005032.
4. Song M, Wang Y, Shang Z F, et al. Bystander autophagy mediated by radiation-induced exosomal miR-7-5p in non-targeted human bronchial epithelial cells:[J]. Sci Rep, 2016, 6:3016
Q1：外泌體的提取方法有哪些？
A：外泌體的提取/富集方法有超高速離心，密度梯度離心，流式、磁珠篩選，高分子聚合物等。需要根據(jù)樣品類型的不同選擇不同的提取方法，這四類提取方法的外泌體產(chǎn)量、純度以及所需樣品量均不同，需要根據(jù)實(shí)際情況選擇對(duì)應(yīng)的提取方法。
Q2：如何進(jìn)行外泌體鑒定？
A：外泌體鑒定目前采用的是電鏡和West-blot。典型的外泌體電鏡觀察圖是30-100nm 大小的球形或碗形囊泡。West-blot鑒定時(shí)可以選擇外泌體特異性蛋白做 West-blot 鑒定。 WB 可以選擇最多的蛋白一般是和 MVBs 合成相關(guān)的蛋白（Alix、 TSG101）及四次跨膜蛋白（CD9, CD63,CD81, CD82），同時(shí) WB 時(shí)能做 non exosome marker 最好，比如，GRP94, EEA1,Cytochrome c, GM130, PMP70, Calreticulin, prohibitin 等，這些蛋白都是 exosome 沒(méi)
有，細(xì)胞總蛋白中才有。
非靶向人類支氣管上皮細(xì)胞旁自噬由輻射誘導(dǎo)的外泌體miR-7-5p介導(dǎo)
研究背景
輻射誘導(dǎo)的旁效應(yīng)（RIBE）描述了一組非靶向細(xì)胞接收輻照細(xì)胞旁信號(hào)的生物學(xué)效應(yīng)。在放射治療中，RIBE會(huì)給癌旁正常組織帶來(lái)潛在危害，具有比預(yù)想更高的風(fēng)險(xiǎn)。從輻照細(xì)胞到細(xì)胞外微環(huán)境，某些物質(zhì)的過(guò)量釋放會(huì)造成有害的影響。例如，細(xì)胞因子和活性氧已被證實(shí)通過(guò)細(xì)胞外介質(zhì)或縫隙連接參與RIBE過(guò)程。然而，RIBE介導(dǎo)的信號(hào)和細(xì)胞間信息通路尚不完全清楚。
研究結(jié)果
在這項(xiàng)研究中，運(yùn)用miRNA微流體芯片對(duì)外泌體miRNA進(jìn)行了差異表達(dá)譜分析。研究人員首次從受2Gy γ射線照射的人支氣管上皮BEP2D細(xì)胞的外泌體中鑒定出一組差異表達(dá)的miRNA。其中，外泌體中的miR-7-5p被發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)受體細(xì)胞自噬。外泌體介導(dǎo)的自噬明顯被miR-7-5p抑制劑減弱。此外，我們的數(shù)據(jù)表明，由外泌體miR-7-5p誘導(dǎo)的自噬與EGFR PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路相關(guān)。同時(shí)，研究結(jié)果支持外泌體參與RIBE信號(hào)傳播到旁細(xì)胞的過(guò)程。其中外泌體miR-7-5p是旁自噬的重要介質(zhì)。
圖 受體BEP2D細(xì)胞通過(guò)外泌體miR-7-5p誘導(dǎo)旁自噬
參考文獻(xiàn)
Song M, Wang Y, Shang ZF, Liu XD, Xie DF, Wang Q, Guan H, Zhou PK. (2016) Bystander autophagy mediated by radiation-induced exosomal miR-7-5p in non-targeted human bronchial epithelial cells. Scientific Reports. 6:30165.
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