腺病毒（Adenovirus, ADV）是一種無包膜的線性雙鏈DNA病毒，具有廣泛的細(xì)胞和組織感染能力。感染過程劇烈，適于短時間內(nèi)進(jìn)行基因高表達(dá)的實驗，與其它病毒相比，腺病毒最大優(yōu)勢在于插入片段較長，表達(dá)活性強(qiáng)。
體外應(yīng)用時，腺病毒載體轉(zhuǎn)基因效率高（接近100%的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率），且可轉(zhuǎn)導(dǎo)不同類型的細(xì)胞，對于大量難轉(zhuǎn)染細(xì)胞的基因遞送是一個很好的工具。但是，在體內(nèi)應(yīng)用時，由于腺病毒免疫原性強(qiáng)，感染劇烈，故常會引起動物局部組織炎癥反應(yīng)和機(jī)體免疫反應(yīng)，對動物體征和實驗結(jié)果的客觀性造成影響。
腺病毒包裝與純化
腺病毒包裝中表達(dá)質(zhì)粒與穿梭質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，待細(xì)胞出現(xiàn)CPE狀態(tài)后通過收集和過濾細(xì)胞裂解物而純化。
CPE（Cytopathic Effect）：病毒對組織培養(yǎng)細(xì)胞侵染后產(chǎn)生的細(xì)胞變性，利用此種病變效應(yīng)可進(jìn)行病毒定量。
腺病毒滴度檢測
檢測方法：酶聯(lián)免疫法腺病毒滴度測定，根據(jù)計算感染后染成褐色的陽性細(xì)胞數(shù)，來計算病毒滴度
實驗原理：腺病毒感染的陽性細(xì)胞表達(dá)的衣殼蛋白被染成褐色
檢測方法：免疫顯色方法。
實驗原理：通過抗5型腺病毒外殼蛋白的單抗與感染腺病毒樣品的細(xì)胞結(jié)合，再用HRP標(biāo)記的二抗與一抗結(jié)合，經(jīng)顯色液顯色，被感染的細(xì)胞變成褐色，根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)，來計算病毒滴度。
腺病毒載體優(yōu)勢
① 表達(dá)快，腺病毒感染細(xì)胞后，1-2天即可表達(dá)
② 載體容量大，感染效率高，常用于感染難感染的細(xì)胞
③ 不整合到染色體中，無插入致突變性
④ 具有嗜肝性，易于感染肝細(xì)胞，腺病毒的體內(nèi)應(yīng)用通過是用于感染肝臟
不過由于腺病毒免疫原性高，對某些對外源刺激敏感的動物模型和組織中易造成炎癥，體內(nèi)應(yīng)用需謹(jǐn)慎。
載體選擇
腺病毒產(chǎn)品，用于操作編碼基因和非編碼基因，如lncRNA、microRNA、circRNA。以下腺病毒載體可供您選擇：
應(yīng)用實例
1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝臟]
注射部位：肝臟
載體名稱：Ad-CBS
注射方式：尾靜脈
注射量：10ul，1 x1011PFU/mL
檢測時間：1周
2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝臟]
注射部位：肝臟
載體名稱：Ad-ATG7
注射方式：尾靜脈
注射量：1 x109PFU /mice
檢測時間：10天
3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]
注射部位：大鼠大腦皮層
載體名稱：Ad-FBLN
注射方式：腦立體定位注射
注射量：三種不同劑量
檢測時間：7天
和元生物腺病毒的生產(chǎn)和指控采取了國際學(xué)術(shù)界公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)流程，采用二質(zhì)粒系統(tǒng)在293細(xì)胞中進(jìn)行包裝。所獲得的病毒顆粒經(jīng)過超速梯度離心和過濾，并通過殼蛋白免疫法進(jìn)行滴度測定。一般情況下腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml，完全可以滿足各類實驗的使用要求。
