激光掃描共聚焦顯微鏡(laser scanning confocal microscopy,LSCM)是近代生物醫(yī)學(xué)圖象儀器。它是在熒光顯微鏡成象的基礎(chǔ)上加裝激光掃描裝置,使用紫外光或可見光激發(fā)熒光探針。利用計算機進(jìn)行圖象處理,從而得到細(xì)胞或組織內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)的熒光圖象,以及在亞細(xì)胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值、膜電位等生理信號及細(xì)胞形態(tài)的變化。
渦狀區(qū)LSCM圖像
中央?yún)^(qū)LSCM圖像
包埋→制片→拍照
以下所有樣本必須盡量新鮮,固定液或懸浮液都不得冷凍結(jié)冰!
1. 電鏡檢測取材較為嚴(yán)格,取材需要迅速,材料塊要小,固定液和材料比例為10:1。使用4%多聚甲醛加少量新鮮配制的戊二醛固定,使其終濃度為0.5%~1%。4℃保存或冰浴(條件允許,推薦)運輸至我方。
2. 外秘體囊泡等用緩沖液(如PBS)或者試劑盒中的保存液懸浮,遠(yuǎn)距離-80℃凍存運輸,近距離4℃保存運輸,盡快制片及時電鏡觀察拍照。
注:將所取樣本盡可能固定在生活狀態(tài)下,并保存樣本的抗原活性;免疫電鏡由于GA濃度很低微細(xì)結(jié)構(gòu)變化大,2h或過夜中間換液2~3次。