服務(wù)介紹:
細(xì)胞凋亡期間基因組DNA被剪切后可能會(huì)形成低分子量的雙鏈DNA片段或者高分子量的單鏈DNA片段,這些受損的DNA片段斷端可通過酶反應(yīng)修飾核苷酸末端3’-OH被識(shí)別。TUNEL反應(yīng)可將凋亡與壞死及藥物和輻射誘導(dǎo)的DNA鏈斷裂區(qū)分開來。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示:
實(shí)驗(yàn)過程:
- 經(jīng)過固定及透膜后的細(xì)胞用微球菌核酸酶(micrococcal nuclease)或重組DNA酶(Dnaseirecombinant)在15-25℃條件下孵育10 min后再加入TUNEL反應(yīng)液。
- TUNEL反應(yīng)液孵育:樣品中加入50 μl新鮮配置的TUNEL反應(yīng)液后在37℃潮濕環(huán)境中避光孵育60 min,孵育完畢后吸干凈TUNEL反應(yīng)液棄之,加入PBS輕柔沖洗3次;
- 4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色:加入配置好的DAPI染液于室溫下孵育10 min吸出。PBS沖洗3次后,加入沒過細(xì)胞的PBS保濕;
- 觀察和分析:光學(xué)顯微鏡下觀察。
樣本運(yùn)輸要求:
石蠟切片常溫、冰凍切片-20℃、固定后細(xì)胞爬片4℃