小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（mice aortic endothelial cells，MAEC）分離自主動(dòng)脈組織；主動(dòng)脈是體循環(huán)動(dòng)脈的主干。由左心室發(fā)出，起始部有主動(dòng)脈瓣，可依次分為升主動(dòng)脈，主動(dòng)脈弓和降主動(dòng)脈。降主動(dòng)脈又分為胸主動(dòng)脈和腹主動(dòng)脈。接受左心室搏出的血液，并發(fā)出各級(jí)分支將血液運(yùn)輸?shù)饺砀鹘M織、器官。當(dāng)主動(dòng)脈病變(如主動(dòng)脈瘤、主動(dòng)脈瓣狹窄、主動(dòng)脈破裂等)時(shí)可影響全身血液的供應(yīng)。
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
二維碼.jpg)