大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞分離自海馬體(Hippocampus),又名海馬回、海馬區(qū)、大腦海馬,海馬體主要負(fù)責(zé)記憶和學(xué)習(xí)。海馬神經(jīng)元細(xì)胞是海馬區(qū)的主要細(xì)胞組成,主要功能是參與近期學(xué)習(xí)、情緒及內(nèi)臟功能調(diào)節(jié)、是老年癡呆、癲癇等疾病的主要病灶之一。海馬神經(jīng)元細(xì)胞是研究神經(jīng)細(xì)胞生物學(xué)特性和外源干擾因素作用的有效細(xì)胞模型。
1. 將培養(yǎng)瓶(板)用多聚賴氨酸包被;
2. 取新生24 h的SD大鼠斷頭處死,取出全腦;
3. 以腦中線為起點(diǎn),小心撥開(kāi)大腦顳葉皮層,暴露出新月?tīng)詈qR回,小心取出海馬組織,剪碎組織;
4. 組織消化和計(jì)數(shù);
5. DMEM/F12培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,臺(tái)盼藍(lán)染色快速計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞終濃度為105個(gè)/ml,接種于培養(yǎng)瓶;
6. 換液:接種后24 h將培養(yǎng)液換成無(wú)血清DMEM/F12培養(yǎng)液,第48 h時(shí)加入10 μmol/L的阿糖胞苷,以抑制非神經(jīng)元細(xì)胞的過(guò)度生長(zhǎng),隨后每3 d半量換液;
7. 最后就是標(biāo)記蛋白檢測(cè)。