骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)是存在于哺乳動物的骨髓基質(zhì)中的一種具有分化形成骨、軟骨、脂肪、神經(jīng)及成肌細(xì)胞的多種分化潛能的細(xì)胞亞群。
1. 將5-7日齡大乳鼠處死，剝離出雙側(cè)股骨及脛骨；
2. 骨兩端剪口后，1ml無菌注射器吸取DMEM反復(fù)沖洗骨髓腔；
3. 收集細(xì)胞懸液，3ml完全培養(yǎng)基（含10%血清）重懸細(xì)胞，接種于6cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；
4. 16-24小時后倒置顯微鏡觀察細(xì)胞貼壁情況，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，PBS沖洗，加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
5. 三天內(nèi)每日觀察細(xì)胞生長情況并PBS沖洗、換液，后隔日換液。
6. 細(xì)胞融高于90%時，吸除培養(yǎng)基，PBS沖洗，加入胰蛋白酶溶液 1ml，37°C 消化貼壁細(xì)胞2-3min；
7. 顯微鏡下觀察細(xì)胞皺縮變圓后，加入 1ml 完全培養(yǎng)基終止消化。
8. 加入完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種細(xì)胞于新的培養(yǎng)皿內(nèi)，培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。每日觀察細(xì)胞生長情況，隔日換液。
9. 標(biāo)記蛋白檢測。
