對心肌酶檢查,檢查心肌酶主要是確定心肌缺血壞死或細(xì)胞膜通透性。主要包括的項目有乳酸脫氫酶(LDH)、乳酸脫氫酶同工酶(LDH-1)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CKMB)四項。
1、樣本接收:血清、血漿、組織、細(xì)胞。
2、實驗步驟:(具體項目依據(jù)相應(yīng)說明書操作)
1、血清樣本(干冰運(yùn)輸)
將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存(-20℃或-80℃)。
2、血漿樣本(干冰運(yùn)輸)
收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存(-20℃或-80℃)。
3、組織樣本
取組織塊(0.1g~0.2g)最少可到2~5mg在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,準(zhǔn)確稱重,放入5ml的勻漿管中。按重量:體積=1:9的比例加入勻漿介質(zhì)或者0.86%的生理鹽水于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊,進(jìn)行勻漿。將制備好的勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)2500轉(zhuǎn)/分左右,離心10~15分鐘,取上清液進(jìn)行測定。制備好的勻漿液建議不要凍存,最好當(dāng)天進(jìn)行測定,如放置時間過長相關(guān)酶活會有所下降。
4、細(xì)胞樣本
貼壁細(xì)胞:用胰酶將細(xì)胞消化下來,或用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下來,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,棄上清留細(xì)胞沉淀,干冰運(yùn)輸。
懸浮細(xì)胞:將培養(yǎng)液1000轉(zhuǎn)/分,離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀,干冰運(yùn)輸。
細(xì)胞上清:3000轉(zhuǎn)/分,離心15min取上清,上清立即用于實驗,或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。