將外源DNA分子導(dǎo)入到受體細(xì)胞中,使之獲得新的遺傳特性的一種方法。將對數(shù)生長期的細(xì)菌(受體細(xì)胞)經(jīng)理化方法處理后,細(xì)胞膜的通透性發(fā)生暫時(shí)性改變,成為能允許外源DNA分子進(jìn)入的感受態(tài)細(xì)胞。進(jìn)入受體細(xì)胞的DNA分子通過復(fù)制和表達(dá)實(shí)現(xiàn)信息的轉(zhuǎn)移,使受體細(xì)胞具有了新的遺傳性狀。
1. 取一管感受態(tài)細(xì)胞,置于冰上融解;
2. 將DNA分子加入到感受態(tài)細(xì)胞的離心管中,輕彈混勻,冰上放置30 min;
3. 42℃水浴熱激30 s,立即取出,置于冰上迅速冷卻3 min;
4. 離心管中加入500 μL LB液體培養(yǎng)基(不含有抗生素),37℃,200 rpm培養(yǎng)1 h;
5. 取適量培養(yǎng)液均勻涂在含有Amp抗生素的LB固體培養(yǎng)基平板上,37℃培養(yǎng)12~16 h;
6. 在超凈臺(tái)中挑取LB固體培養(yǎng)基平板中大小均勻的單克隆于1 mL含有Amp的LB液體培養(yǎng)基中,37℃,200 rpm培養(yǎng)4 h;
7. 取2 μL菌液進(jìn)行PCR驗(yàn)證,用1%的瓊脂糖凝膠對PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測。
1. 組織、細(xì)胞:-80℃保存,干冰運(yùn)輸;
2. 血液:EDTA抗凝管,4℃運(yùn)輸;
3. DNA:體積≥50μl,濃度≥50 ng/μl,4℃運(yùn)輸。