實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）是一種以PCR反應(yīng)為基礎(chǔ)的DNA定量技術(shù)，通過(guò)對(duì)目標(biāo)基因在擴(kuò)增過(guò)程中產(chǎn)生的拷貝數(shù)進(jìn)行實(shí)時(shí)的定量，從而達(dá)到對(duì)目的基因的定性和定量分析?，F(xiàn)有兩種常用的方法對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行熒光定量：一種是利用熒光染料與雙鏈DNA結(jié)合，通過(guò)熒光強(qiáng)度進(jìn)行熒光定量；另一種是利用攜帶了熒光報(bào)告基因的特異性DNA探針對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行定量。
常用熒光染料有：SYBR GreenⅠ、EvaGreen、LC Green等
Taqman熒光探針作為定量檢測(cè)的首選，是一種寡核苷酸，充當(dāng)DNA復(fù)制的起點(diǎn)，熒光基團(tuán)連接在探針的5'末端，淬滅劑連接在3'末端。PCR擴(kuò)增時(shí)加入引物和探針，探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，探針酶切降解，報(bào)告熒光基團(tuán)與淬滅熒光基團(tuán)分離，熒光信號(hào)被系統(tǒng)檢測(cè)接收，每擴(kuò)增一條DNA鏈伴隨一個(gè)熒光分子形成，實(shí)時(shí)熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物同步進(jìn)行，實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)定量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。相對(duì)于SYBR熒光染料具有序列特異性，直結(jié)合到互補(bǔ)區(qū)的強(qiáng)靈敏度。相較于雜交探針，其只需設(shè)計(jì)一條探針，既方便也能完成定量PCR要求。
獲得游離5，-羥基→合成DNA原料→帶帽（capping）反應(yīng)→轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定磷酸三酯→重復(fù)步驟4
探針引物設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)流程：
目的基因查找比對(duì)→探針與引物設(shè)計(jì)→合成
熒光定量QPCR實(shí)驗(yàn)流程：
取材→RNA提取逆轉(zhuǎn)錄成cDNA→實(shí)時(shí)熒光定量PCR-(QPCR產(chǎn)物電泳)→數(shù)據(jù)分析
基因名稱(chēng)和種屬、或已知探針引物序列、或基因ID號(hào)
熒光定量QPCR送樣運(yùn)輸要求：
組織、細(xì)胞：-80℃保存，干冰運(yùn)輸；
血液：EDTA抗凝管，4℃運(yùn)輸；
RNA樣本：體積≥10 μL，干冰運(yùn)輸。
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