DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法還有物理法、化學(xué)法和酶法等。從種類繁多的樣本中分離和純化基因組DNA與質(zhì)粒DNA,可用于種屬鑒定、PCR、甲基化實(shí)驗(yàn)等。
定量是指檢測(cè)樣本中DNA的濃度。通過其定量可檢測(cè)DNA的含量,DNA量過高,會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增;過低可能導(dǎo)致等位基因的“丟失”。比如一代測(cè)序、二代測(cè)序、法醫(yī)學(xué)等對(duì)其含量要求都不同。在臨床上,常用于乙肝病毒的DNA定量。
DNA分子提取得到以后,需要通過電泳技術(shù)來檢測(cè)其數(shù)量和質(zhì)量。瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳是基因操作的核技術(shù)之一,它能夠用于分離、鑒定和純化DNA片段。該技術(shù)操作簡(jiǎn)單而迅速,已經(jīng)成為許多通用的分子生物學(xué)研究方法,如DNA重組、DNA核苷酸序列分析、DNA限制性內(nèi)切酶分析及限制性酶切作圖等的技術(shù)基礎(chǔ)。
取材? DNA提取擴(kuò)增?數(shù)據(jù)分析? DNA擴(kuò)增樣本獲取?上機(jī)?數(shù)據(jù)分析
制膠?點(diǎn)樣?跑膠?紫外透射檢測(cè)及拍照
1. 組織、細(xì)胞:-80℃保存,干冰運(yùn)輸;
2. 血液:EDTA抗凝管,4℃運(yùn)輸。
3. DNA樣本:每個(gè)樣本5μl,4℃運(yùn)輸(定量)。
4. DNA樣本:體積≥10 μL,4℃運(yùn)輸(電泳)。