高效液相色譜，是液體樣本被壓力注入色譜柱，通過分析物與固定相相互作用不同，不同物質(zhì)按照順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同信號，具有高分離度，高重復(fù)性的優(yōu)勢。液相色譜在藥物研發(fā)，環(huán)境分析，食品分析，臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，可完成純度測定，復(fù)雜生物樣品中分析物含量測定等。方法學(xué)開發(fā)的目的就是在熱力學(xué)和動力學(xué)之間找到分析物的平衡點(diǎn)，以期來更好對樣品中分析組分進(jìn)行分離，相互定量不產(chǎn)生干擾。
①含真實(shí)樣本的方法開發(fā)：報告提供方法檢測下限，線性范圍(根據(jù)真實(shí)樣本調(diào)整)，樣品檢測結(jié)果，詳細(xì)色譜條件，不做多基質(zhì)條件的摸索；②不含真實(shí)樣本的方法開發(fā)：已經(jīng)完成方法開發(fā)，有成熟的方法-樣本前處理-上機(jī)檢測報告提供方法檢測下限，上下限的倍數(shù)關(guān)系，詳細(xì)色譜條件，不做基質(zhì)條件的摸索。
標(biāo)準(zhǔn)品測量配制→標(biāo)品預(yù)試→樣品上機(jī)預(yù)試→調(diào)整儀器參數(shù)→驗(yàn)證線性倍數(shù)→驗(yàn)證基質(zhì)干擾→完成方法開發(fā)→樣本前處理→上機(jī)檢測
1、細(xì)胞樣本
①細(xì)胞量1×107個，收集細(xì)胞沉淀，-80℃保存，純干冰運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融。
②收集時，用預(yù)冷PBS緩沖液清洗三次，去除培養(yǎng)基成分，然后離心去除上清保存。
③如需要進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，則需送樣前進(jìn)行。
2、全血樣本
①樣本量200 μL，EDTA、EDTA-K2或肝素鈉抗凝，4℃保存，冰袋運(yùn)輸，避免劇烈振蕩和冷凍結(jié)冰。
②由于全血常規(guī)保存期為7天，如需檢測，需要提前至少1周聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)周期情況，以便溝通協(xié)調(diào)安排檢測。
3、血清、血漿樣本
①樣本量100 μL，-80℃保存，純干冰運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融及溶血。
4、尿液樣本
①樣本量200 μL，-80℃保存，純干冰運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融及帶入糞便殘渣。
5、動物組織樣本
①樣本量300 mg，-80℃保存，純干冰運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融。
②收集時，用預(yù)冷PBS緩沖液沖洗表面血液，并用濾紙吸干多余水分，避免凍存時結(jié)冰。
③固定液浸泡過的樣本無法進(jìn)行檢測。
6、植物組織樣本
①樣本量500 mg，-80℃保存，純干冰運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融。
②收集時，用預(yù)冷PBS緩沖液沖洗表面泥沙，并用濾紙吸干多余水分，避免凍存時結(jié)冰。
③固定液浸泡過的樣本無法進(jìn)行檢測。
