昨日，國(guó)家心血管病專家委員會(huì)血管外科專業(yè)委員會(huì)的專家學(xué)者發(fā)布了《遺傳性胸主動(dòng)脈瘤/夾層基因檢測(cè)及臨床診療專家共識(shí)》，旨在闡述基因檢測(cè)在遺傳性胸主動(dòng)脈病診斷及篩查中的作用，以及明確診斷后針對(duì)各種類型胸主動(dòng)脈病患者提出醫(yī)療和生活方式管理方面的建議。共識(shí)一經(jīng)發(fā)出，引起關(guān)注此類疾病同行朋友們的熱烈討論，本文就共識(shí)中一些大家較關(guān)注的點(diǎn)做一些分析。（詳細(xì)共識(shí)解讀請(qǐng)查看：《遺傳性胸主動(dòng)脈瘤/夾層基因檢測(cè)及臨床診療專家共識(shí)》）
病史采集及臨床診斷建議中提出，建議詳細(xì)采集患者個(gè)人臨床信息和家族史。因?yàn)樾刂鲃?dòng)脈瘤患者通常無(wú)癥狀，直到突發(fā)急性主動(dòng)脈并發(fā)癥才緊急就醫(yī)，很多時(shí)候已經(jīng)錯(cuò)過(guò)最佳預(yù)防及治療期。提前了解患者基因信息，做好預(yù)防性措施，可以起到防范于未然的作用。
臨床治療及隨訪檢查建議中提出，主動(dòng)脈患者何時(shí)進(jìn)行藥物和手術(shù)治療，除依據(jù)患者的病理指征外，不同基因突變導(dǎo)致的不同亞型的主動(dòng)脈病兇險(xiǎn)程度有差異，對(duì)于主動(dòng)脈手術(shù)時(shí)機(jī)的選擇也具有一定指導(dǎo)意義。同時(shí)，針對(duì)不同基因背景和個(gè)體因素的胸主動(dòng)脈病患者，需要選擇合適的預(yù)防性手術(shù)指征，以及合適的監(jiān)測(cè)、隨訪周期及檢查方式。
在遺傳學(xué)檢測(cè)及家系篩查建議中提出，對(duì)遺傳性主動(dòng)脈病患者進(jìn)行基因檢測(cè)，一方面可在患者癥狀表現(xiàn)完全之前明確診斷，另一方面也可提示疾病的臨床特征，指導(dǎo)干預(yù)時(shí)機(jī)、治療方案及預(yù)后管理。依據(jù)先證者的基因檢測(cè)結(jié)果，對(duì)家系成員進(jìn)行特定位點(diǎn)篩查，具有輔助診斷、癥狀前干預(yù)及預(yù)后判斷等作用。多項(xiàng)專家共識(shí)都闡述了基因檢測(cè)在主動(dòng)脈病診斷、治療及管理中的重要作用，并提供了具體的指導(dǎo)方案，見(jiàn)圖。
根據(jù)專家共識(shí)建議，主動(dòng)脈疾病相關(guān)基因突變的檢測(cè)對(duì)于主動(dòng)脈疾病的治療具有極其重要和關(guān)鍵的作用。
在前期市場(chǎng)調(diào)研中我們了解到這類疾病基因檢測(cè)的市場(chǎng)需求，并與相關(guān)專家共同開(kāi)發(fā)了一款遺傳性主動(dòng)脈疾病基因檢測(cè)試劑盒，包含18個(gè)主動(dòng)脈疾病相關(guān)基因的編碼區(qū)，覆蓋剛發(fā)布的共識(shí)中10個(gè)檢測(cè)至少要包含的核心基因，并覆蓋7個(gè)可以包含的基因，為客戶提供一個(gè)較為全面的主動(dòng)脈疾病基因檢測(cè)解決方式。（產(chǎn)品詳情請(qǐng)點(diǎn)擊：VariantPro遺傳性主動(dòng)脈疾?。℉eritable Aortic Disease ）Panel介紹）
遺傳性主動(dòng)脈疾病基因檢測(cè)Panel基本性能
針對(duì)13種遺傳性主動(dòng)脈疾病：馬凡綜合征、Loeys-Dietz綜合征、Ehlers-Danlos綜合征、先天性攣縮性蜘蛛指綜合征、Shprintzen-Goldberg綜合征、家族性胸主動(dòng)脈瘤/夾層等
18個(gè)基因的編碼區(qū)：SKI、TGFB2、COL5A2、COL3A1、TGFBR2、MYLK、FBN2、COL5A1、TGFBR1、NOTCH1、PRKG1、ACTA2、KIAA1279、FBN1、SMAD3、MYH11、SMAD4、SLC2A10
Panel Size：68.08kb
方法學(xué)： NGS法
采用技術(shù)：VariantProTM一步式捕獲建庫(kù)方法
適配平臺(tái)：Illumina NextSeq, MiSeq, MiniSeq, HiSeq2000/2500/3000/4000/X, NovaSeq
測(cè)序模式：PE150
擴(kuò)增子覆蓋度：99.61%
DNA需求量：100-200ng
操作時(shí)間：捕獲建庫(kù)手動(dòng)操作時(shí)間20分鐘左右；PCR時(shí)間6-8小時(shí)；上機(jī)前文庫(kù)純化時(shí)間60分鐘左右
富集特異性：90±5%
擴(kuò)增子均一性：90±5% at 0.2×mean coverage
測(cè)序數(shù)據(jù)量與覆蓋深度
擴(kuò)增子均一性：90±5%at 0.2×mean coverage
困難擴(kuò)增子分析
#418擴(kuò)增子（394bp）高GC；#77擴(kuò)增子（410bp）低GC，重復(fù)區(qū)域，存在polyA。以上兩個(gè)擴(kuò)增子擴(kuò)增困難。#55擴(kuò)增子（400bp）局部低GC，增加數(shù)據(jù)量可以提高覆蓋度。
根據(jù)《單基因遺傳性心血管疾病基因診斷指南》（2019版），NGS無(wú)法捕獲的區(qū)域，可以用sanger測(cè)序進(jìn)行補(bǔ)測(cè)。試劑盒中總計(jì)2個(gè)擴(kuò)增子，合計(jì)170bp區(qū)域難以捕獲，可以用2個(gè)反應(yīng)sanger測(cè)序補(bǔ)測(cè)。
VariantPro?一步式多重PCR方法
1.提升特異性——omega primer需要3p臂和5p臂同時(shí)特異結(jié)合模板，理論特異性提升超過(guò)26,000倍。
2.寬容模板變異——5p arm的長(zhǎng)度基本達(dá)到35bp以上，允許引物最大程度的錯(cuò)配能力。
3.降低引物二聚體的形成——OmegaPrimer中負(fù)責(zé)特異性擴(kuò)增的3p arm在（15-17nt），減少了引物二聚體形成的可能性。
4.容納更長(zhǎng)的真實(shí)序列——相較于傳統(tǒng)多重PCR引物，OmegaPrimer中引物所占擴(kuò)增子區(qū)域減小，有效序列比例提高。
通用引物與特異性引物一起加入PCR反應(yīng)管中，只需一個(gè)PCR體系即可完成靶向序列捕獲到測(cè)序文庫(kù)制備全過(guò)程。無(wú)需開(kāi)管、閉管、轉(zhuǎn)管操作，最大程度減少實(shí)驗(yàn)室外部污染，最大限度避免人工操作可能引入的錯(cuò)誤和系統(tǒng)誤差。
參考文獻(xiàn)
1.國(guó)家心血管病專家委員會(huì)血管外科專業(yè)委員會(huì). 遺傳性胸主動(dòng)脈瘤/夾層基因檢測(cè)及臨床診療專家共識(shí). 中國(guó)循環(huán)雜志，2019, 34: 319-325.
2.ErbelR, AboyansV, BoileauC,et al. 2014 ESC Guidelines on the diagnosis and treatment of aortic diseases:Document covering acute and chronic aortic diseases of the thoracic and abdominal aorta of the adult TheTask Force for the Diagnosis and Treatment of Aortic Diseasesof the European Society of Cardiology (ESC). Eur Heart J, 2014, 35: 2873-2926.
3.楊航等.遺傳性主動(dòng)脈疾病基因檢測(cè)的應(yīng)用.中國(guó)循環(huán)雜志2016 年3月第31卷第3期（總第213期）
4.中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì),精準(zhǔn)心血管病學(xué)學(xué)組,中國(guó)醫(yī)療保健國(guó)際交流促進(jìn)會(huì),精準(zhǔn)心血管病分會(huì)中華心血管病雜志編輯委員會(huì).單基因遺傳性心血管疾病基因診斷指南[J],中華心血管病雜志2019年3月第47卷第3期
如需了解更多產(chǎn)品詳情，歡迎電聯(lián)：0571-87662413，郵箱：[email protected]。
VariantBaits? Target Enrichment System
液相雜交捕獲系統(tǒng)
基于自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)μPara?o? 微流體芯片平臺(tái)合成RNA捕獲探針，采用液相雜交技術(shù)捕獲靶標(biāo)DNA，使用生物素標(biāo)記探針誘餌，探針序列與靶向序列互補(bǔ)，完成靶向序列文庫(kù)的富集與制備?？捎糜趶男〉酱笠?guī)模的基因捕獲，容忍某些局部模板的變異。
VariantPro? One-Step Multiplex PCR System
一步式多重PCR建庫(kù)系統(tǒng)
經(jīng)過(guò)LC Sciences科學(xué)家兩年潛心攻關(guān)，于2015年成功研發(fā)出VariantPro?一步式多重PCR建庫(kù)系統(tǒng)，在目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，通過(guò)多重PCR的方式進(jìn)行目標(biāo)區(qū)域擴(kuò)增，通常不受引物間模板變異的影響。文庫(kù)制備可簡(jiǎn)化成一步，人工操作時(shí)間僅5分鐘，可用于小到中規(guī)模的基因捕獲。
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